蘇慧倫于臺北市，依次就讀于臺北市永春國小、臺北市懷生國中、華岡藝校戲劇科。1990年她在朋友（柯一正）的介紹之下去試音，之后便與朱雀文化制作簽約（由滾石唱片發(fā)行）。
1990年3月蘇慧倫出道，發(fā)行首張專輯《追得過一切》，1994年蘇慧倫與滾石唱片簽約；1995年12月24日與陳小春聲演香港電臺“普通話戲中戲：的士情緣”（導演：利子良）；1996年發(fā)行專輯《LEMONTREE》；1997年08月發(fā)行國語專輯《傻瓜》；1996年與郭子共同舉辦演唱會“郭友慧”；1997年舉辦個人兩場演唱會：“傻瓜無敵登陸地球”；1998年10月上旬與任賢齊、五月天赴昆明、上海、廣州、成都等地舉行演唱會。
2001年推出《戀戀真言》專輯后，蘇慧倫開始從事戲劇演出；蘇慧倫在1993年第一次參與了電影《只要為你活一天》演出；在2002年公視人生劇展《童女之舞》中突破演出女同志的角色；在2005年的《深海》飾演一名憂郁癥患者；2008年，蘇慧倫以電影《流浪神狗人》獲得羅馬亞洲電影節(jié)最佳女主角，成為從影15年來的第一個演技獎項。
2010年舉辦《我們的青春啊！》演唱會，參與《滾石30快樂天堂》演唱會。2013年8月演唱動畫電影《昆塔：盒子總動員》的主題曲《不可能是不可能的事》與周華健“父女對唱”。